液氮保藏法

点击次数:   更新时间:18/09/26 09:44:09     来源:www.dmjinfu.com关闭分    享:
  液氮保藏法,亦称超低温保藏法。主要利用微生物在低于-130°C的低温下新陈代谢趋于停止的原理,在液氮中(-196°C的超低温下)有效地进行菌种保藏的方法。此法操作简便、高效,保藏期一般可达到15年以上,是目前公认的菌种长期保藏技术之一,并且适用于各类微生物菌种的保藏。
  但是,采用液氮保藏,需购置超低温液氮设备,且液氮消耗量大,费用高。液氮低温保藏的保护剂,一般选择甘油、二甲基亚砜、糊精、血清蛋白、聚乙烯氮戊环、吐温80等,常用的是甘油(10%?20%),不同微生物应选择不同的保护剂,保护剂的浓度应控制在不造成微生物死亡为宜。
  操作方法:
  把微生物细胞混悬于含保护剂(20%甘油,10%DMSO等)的液体培养基中(也可把含菌琼脂块直接浸入含保护剂的培养液中),分装入耐低温的安瓿瓶中后,作缓慢预冷,然后移至液氮罐中的液相(-196℃)或气相(-156℃)作长期超低温保藏。
  操作原则:
  “慢冻快溶”。
  原理:
  利用微生物在-130℃以下新陈代谢趋于停止而有效地保藏微生物。
  0.5mol/L左右的甘油或二甲亚砜(dimethyl sulfoxide,DMSO)可透入细胞,并通过降低强烈的脱水作用而保护细胞。
  保藏期长(15年以上),且适合保藏各类微生物,尤其适宜于保存难以用冷冻干燥保藏法保藏的微生物,如支原体、衣原体、不产孢子的真菌、微藻和原生动物等。
小编:Qian
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